液相色譜儀的原理就是利用待分離的各種物質(zhì)在兩相中的分配系數(shù)、吸附能力等親和能力的不同來進(jìn)行分離的。使用外力使含有樣品的流動(dòng)相氣體、液體、通過一固 定于柱中或平板上、與流動(dòng)相互不相溶的固定相表面。當(dāng)流動(dòng)相中攜帶的混合物流經(jīng)固定相時(shí)，混合物中的各組分與固定相發(fā)生相互作用。
液相色譜儀方法建立實(shí)驗(yàn)開始之前，應(yīng)明確對(duì)方法的這些要求：
(1)主要目的是什么？定量或定性，還是定性、定量同時(shí)做？
(2)是否有必要解析出樣品的所有成分？譬如可能有必要分離出產(chǎn)品中的所有降解物或雜質(zhì)，以使含量測(cè)定結(jié)果更加可靠，但卻沒必要將它們彼此分開。
(3)如要求定量分析，準(zhǔn)確度與精密度需多大？樣品主要成分的精密度通常能達(dá)到±1—2%，特別是不需樣品預(yù)處理的情況。
(4)特殊化合物可能會(huì)以不同的樣品形式出現(xiàn)(如：原料藥，一種或多種形態(tài)，環(huán)保樣品等)。是否需要一種以上的HPLC方法？單一方法分離不同形態(tài)樣品是否理想？
(5)一次將分析多少樣品？當(dāng)必須同時(shí)處理大量樣品時(shí)，運(yùn)行時(shí)間將變得非常重要。
有時(shí)甚至為了縮短運(yùn)行時(shí)間而以犧牲樣品分離度作代價(jià)，如縮短柱長(zhǎng)或加快流速。當(dāng)一次分析的樣品數(shù)目超過10個(gè)，運(yùn)行時(shí)間一般應(yīng)控制在20min以內(nèi)。
(6)將要使用該方法的實(shí)驗(yàn)室中，有哪些HPLC設(shè)備？色譜柱能否恒溫系統(tǒng)能否做梯度洗脫？該方法是否可在不同設(shè)計(jì)與生產(chǎn)的設(shè)備上運(yùn)行？
